Фотоколориметрия и спектрофотометрия в биохимических лабораторных исследованиях

28.01.2021 212 5.0 0

Множество современных биохимических методик, применяемых в клинико-диагностических лабораториях, включают вышеупомянутые методы.    

Приборы, используемые в спектрофотометрических методах, более сложные. Сюда относятся спектрофотометры различных конструкций. С их помощью можно проводить исследования окрашенных и неокрашенных соединений по избирательному поглощению монохроматического света в видимой, ультрафиолетовой и инфракрасной областях спектра. Кроме того, наряду с определением концентрации, можно определять состав, прочность и оптические характеристики веществ, поглощающих свет. Точность спектрофотометрических методов составляет ±0,1-0,5 отн. %.

С целью автоматизации подачи и эвакуации анализируемого раствора, исключения вредного влияния применяемых при фотоэлектроколориметрии и спектрофотометрии веществ на организм исследователя применяются различные виды кювет и приставок к фотоэлектроколориметрам и спектрофотометрам.    
Проточными или сливными кюветами снабжены используемые в лабораториях зарубежных стран гемоглобинометры, билирубинометры, сахариметры. Кюветы в указанных приборах являются стационарными. Они наполняются и освобождаются от анализируемых растворов с помощью нагнетающего и всасывающего устройств.

В универсальном комплексе «БИАН», разработанном и выпускаемом в СССР, имеются блоки микрокювет «БИАН» и сливных кювет «БИАН». Наполнение и эвакуация растворов из кювет в этих блоках осуществляется с помощью сифона.

Однако проточные кюветы отдельно не изготовляются, а поставляются в комплекте автоанализаторов,
таких как «БИАН», «Technikon», «Sachi» и др. На оснащение клинико-диагностических, биохимических лабораторий большинство фотоэлектроколориметров и пектрофотометров поступает без проточных или цилиндрических кювет и оптических приставок Покровского, хотя указанные приборы имеют широкое применение.

В связи с этим нами разработана приставка к фотоэлектроколориметрам и спектрофотометрам (рис. 32), которую может смонтировать и внедрить любая клинико-диагностическая или научно-исследовательская биохимическая лаборатория. Это устройство уже нашло применение в научно- исследовательских и клинико-диагностических лабораториях. Приставка позволяет устранить имеющиеся недостатки в технике спектрофотометрии и колориметрии, перевести операции с кюветой на полуавтоматический режим.
Имеющиеся кюветы в комплекте к фотоэлектроколориметрам и спектрофотометрам в открытой части закрывают герметически подогнанной по размеру кюветы пластинкой из плексигласа или другого подходящего материала с отверстиями для штуцеров 7, 8 и сифона 10. Всю поверхность пластины покрывают универсальным клеем (эпоксидной смолой или другим) и приклеивают к торцу кюветы. В отверстиях указанной пластины фиксируют герметически штуцер 7, 8 и сифон 10, изготовленные из стекла, лучше марки «пирекс» или кварца (когда приставка используется к спектрофотометрам).

Приставка к фотоэлектроколориметрам и спектрофотометрам

Можно поступать и следующим образом. Под пластину с фиксированными в ней штуцерами и сифоном помещают прокладку из резины или другого эластичного материала. С помощью любого устройства такая пластина герметически прижимается к торцу кюветы. Назначение штуцеров: 8 — для создания вакуума в кювете, 7 - для ввода анализируемого раствора и растворителя: через сифон 10 происходит эвакуация проанализированного раствора и растворителя. В дне кюветы под сифоном 10 делают углубление для стекания в него остатков раствора и растворителя, чтобы полностью эвакуировать их из кюветы.
Камера 3 для пробирок с анализируемым раствором состоит из круглой камеры, находящегося внутри нее диска с гнездами для пробирок и наглухо соединенного с ним стояка 13.

При отверстиях фиксированы подвижно круговые задвижки. Через окошко 14 происходит загрузка камеры 5 пробирками с анализируемым раствором, а также выгрузка их. Вакуум-резервуар 2 представляет собой герметический сосуд с двумя штуцерами в пробке, посредством одного из них он соединяется, через кран 9 с кюветой 11, а с помощью другого в нем создается вакуум. В нижней части вакуум-резервуара есть кран для слива проанализированного раствора и растворителя. Сифон 4 имеет выступ 5, который играет роль пробки, что позволяет уменьшить выход паров растворителя из камеры во время сифонирования.

Сосуд 1 служит для содержания растворителя. Сосуд 2 препятствует выходу паров растворителя из сосуда 1. В него с этой целью наливают дистиллированную воду или другую жидкость, нейтрализующую пары растворителя.

Кювета 11, вакуум-резервуар 12 и сосуды 1 и 2 соединены между собой герметически системой трубок, а камера 3 подсоединяется к этой системе с помощью сифона 4 в момент работы. Соединяющая система трубок имеет прерыватели — два трехходовых крана 6 и 9, благодаря которым приставка функционирует как единое целое и выполняет свое назначение.

Пробирки с растворами для анализа помещают в камеру 3, Из вакуум-резервуара 12 выкачивают воздух, создавая в нем вакуум. Кювету 11 устанавливают в кюветодержатель фотоэлектроколориметра или спектрофотометра. С помощью стояка 13 камеры 3 подводят одну из пробирок в гнезде диска с анализируемым раствором под отверстие в задвижке. Сифон 4 погружают в эту пробирку. С помощью крана 9 кювету // соединяют посредством штуцера 8 с вакуум-резервуаром 12 и создают вакуум в кювете. Краном 6 соединяют штуцер 7 кюветы 11 с сифоном 4. Раствор из пробирки вследствие вакуума переходит в кювету 11. После этого кран 9 перекрывают. Проводят спектрофотометрирование или колориметрирование раствора в кювете 11. Затем краном 9 соединяют вакуум-резервуар 12 с сифоном 10 кюветы и проанализированный раствор переходит в вакуум-резервуар 12. Кран 9 перекрывают. Краном 6 соединяют штуцер 7 кюветы 11 с сифоном в сосуде 1, содержащем растворитель. Краном 9 соединяют вакуум-резервуар 12 со штуцером 8 и вводят в кювету определенное количество растворителя для ее ополаскивания. Краном 6 перекрывают доступ растворителя и соединяют штуцер 7 с сифоном 4.

Растворитель отсасывают из кюветы 1 в вакуум-резервуар 12, соединив для этой цели краном вакуум-резервуар с сифоном 10. После этого приступают к колориметрированию раствора в следующей пробирке, находящейся в камере 3, повторяя все описанные операции. При этом стояком 13 подводят под отверстие в задвижке окошка 4 следующую пробирку с анализируемым раствором.


Читайте также:

Комментарии
Имя *:
Email *:
Код *: